Гост 25383 82: ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза (с Изменением N 1), ГОСТ от 11 августа 1982 года №25383-82

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза (с Изменением N 1), ГОСТ от 11 августа 1982 года №25383-82

ГОСТ 25383-82
(СТ СЭВ 2547-80)

Группа С79

Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_________________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620
(ИУС N 9, 1992 год). — Примечание изготовителя базы данных.

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.А.Тимофеев, И.А.Коблова, Л.М.Шалова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3154

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.88 Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.87 N 1714

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год


Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней — 20 г, домашней птицы и кроликов — 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п.1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4 °С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания 200 г;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

центрифугу с частотой вращения 5000 мин;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см и 1000 см по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. — Примечание изготовителя базы данных.

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 9412-93. — Примечание изготовителя базы данных.

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2.2. (Исключен, Изм. N 1).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой, степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при патологоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови патологоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему).

КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.3.4, 2.3.4.1. (Введены дополнительно, Изм. N 1)

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.2. Проведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.3, 2.4.3.1. (Исключены, Изм. N 1).

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) — 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) — 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+++) — больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Электронный текст документа
подготовлен ЗАО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1982



Редакция документа с учетом
изменений и дополнений
подготовлена ЗАО «Кодекс»

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза (с Изменением N 1), ГОСТ от 11 августа 1982 года №25383-82

ГОСТ 25383-82
(СТ СЭВ 2547-80)

Группа С79

Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_________________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620
(ИУС N 9, 1992 год). — Примечание изготовителя базы данных.

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.А.Тимофеев, И.А.Коблова, Л.М.Шалова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3154

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.88 Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.87 N 1714

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год


Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней — 20 г, домашней птицы и кроликов — 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п.1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4 °С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания 200 г;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

центрифугу с частотой вращения 5000 мин;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см и 1000 см по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. — Примечание изготовителя базы данных.

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 9412-93. — Примечание изготовителя базы данных.

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2.2. (Исключен, Изм. N 1).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой, степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при патологоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови патологоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему).

КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.3.4, 2.3.4.1. (Введены дополнительно, Изм. N 1)

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.2. Проведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.3, 2.4.3.1. (Исключены, Изм. N 1).

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) — 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) — 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+++) — больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Электронный текст документа
подготовлен ЗАО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1982



Редакция документа с учетом
изменений и дополнений
подготовлена ЗАО «Кодекс»

ГОСТ 25383-82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Текст ГОСТ 25383-82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Б. Л. Тимофеев, И. А. Коблова, Л. М. Шало за

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3154

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

i ^ялсажшя’тшъ’ж’яяжшюттшшяршяжттш^ятшчпшщц

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Donic-Xr* ипитшК. .Methods of laboratory diagnostics

of coeeidiosis

(CT СЭВ 2547—80]

j > i ■ ii —i ■»—n »ii—■ i ■ ни I—!■ i ! ■ II »—■ i и штти~этгш1——~i птг~——

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3154 срок действия установлен

с 01.01.83 до 01.01.88

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на все ви iu сельскохозяйственных животных и птиц и \сгаплвливаег методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547—80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

IЛ. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы но стилки.

1.2. Пробы кала берут от живых п павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; ^с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000—от 2% животных.

1 2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней -20 г, домашней птицы и кроликов— 10 г.

Отобранные пробы смешивают, иолуч а я объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от к аж юго животного смешивание проб не производят.

Издаике о фициальное

Перепечатка воспрещена (О Издательство стандартов, 1982

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т. п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п. 1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывак щийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2—4°С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоапатомически измененных частей кишки, у кроликов—также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования. ²

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2Л.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют: микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ

8284—78,

весы лабораторные по ГОСТ 24104—80;

центрифугу марки М-24 или других марок с частотой вращения 2000 об/мин;

сита с ячейками размером 0,5—1,0 мм²;

стаканы стеклянные вместимостью 150—200 см³ по ГОСТ 10394—75;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 10973—75; стекла предметные по ГОСТ 9284—75 и покровные по ГОСТ 6672—75;

пипетки градуированные вместимостью 50 см³ по ГОСТ 20292—74;

посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 8613—75; штатив для пробирок; петли;

вату Iигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556—75; натрий хлористый по ГОСТ 4233—77; цинк сернокислый по ГОСТ 4174—77; магний сернокислый по ГОСТ 4523—77; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.1.2. Подготовка к исследованию 2Л.2.1. Приготовление раствора Бреза

Готовят насыщенный раствор сульфата магния и насыщенный раствор тиосульфата натрия. Растворы смешивают с дистиллированной водой в соотношении 3:3:1.

2.1.2.2. Приготовление флотационного раствора

К 1 л горячей дистиллированной воды добавляют избыток соответствующего химического реактива (насыщенного раствора хлористого натрия пли сульфата цинка или раствора Бреза), выдерживают в течение 12 ч и фильтруют через вату в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять приблизительно 1,3 г/см³.

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3 1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3 г, заливают в ступке 15—20 см³ воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через сито и воронку в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 1—2 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают палочкой так, чтобы не образовались пузыри. Не рекомендуется встряхивать содержимое пробирки. Пробирки с флотационным раствором снова центрифугируют, как указано выше.

С помощью петли пз каждой пробирки берут по три капли раствора и наносят на предметное стекло. Покровное стекло используют лишь для рассеяния капли в случае недостаточной обзорности поля зрения. При массовых исследованиях одной и той же пробы допускается не обжигать петлю после каждого переноса

раствора на предметное стекло, достаточно лишь промыть ее несколькими резкими движениями в пробирке с водой. Однако в начале и конце исследования петлю необходимо обжигать.

Определение наличия ооцист проводят под микроскопом, используя соответствующий определитель.

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру^ материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева или Мак-Мастера.

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Исследуемую пробу кала тщательно гомогенизируют. Взвешивают от 3 до 5 г кала (в зависимости от необходимости точности определения) п размешивают в стакане с 45 см³ воды. Полученную таким образом суспензию фильтруют через сито. 10 см³ фильтрата помещают в центрифужную пррбирку и центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 2 мин.

Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают. Полученной суспензией заполняют счетную камеру. Допускается при отсутствии счетной камеры использовать предметное стекло, на которое наносят 0,15 см³ суспензии и накрывают покровным стеклом. Заполненную камеру или предметное стекло с 0,15 см³ суспензии выдерживают в течение 2 мин, чтобы ооцисты могли подняться к поверхности, и подсчитывают количество ооцист. Полученное число, умноженное на 100, представляет собой содержание ооцист в 1 г кала.

Для более точного определения допускается использовать несколько камер и ооцисты подсчитывают в нескольких камерах. При использовании камеры Горяева ооцисты подсчитывают во всех 225 квадратах и полученную сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает число ооцист в 1 см³ взвеси.

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы обнаружение единичных ооцист (0—100 ооцист на 1 г кала) свидетельствует о наличии кокцидий в окружающей среде и течении субклинического заболевания.

Наличие 101—1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует:

для Eimeria tenella и Eimeria necatux — о заражении средней степени;

для Eimeria maxima — о сильном заражении;

для Е. acervulina — о слабом заражении.

Наличие свыше 1000 ооцист в 1 г кала — признак сильного заражения.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала (для Е. bovis и Е. zuetnii) свидетельствует о слабой инфек

ции, до 5000 — об инфекции средней тяжести, свыше 5000 —о сильной инфекции.

Для определения вида Eimeria используют существующие определители.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком слабой инфекции, до 100000 — сильной инфекции, свыше 100000 — очень сильной инфекции.

2.3. Метод исследования павших животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при паталогоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови паталогоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

2 3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239—77;

пинцеты по ГОСТ 21241—77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 10973—75;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Паталогически измененные части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия меро-зоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пинетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

2.3 3. Обработка результатов

2.3.3.1. В случае установления единичных стадий развития кокцидий заболевание кокцидиозом рассматривается как вторичная инфекция, которая не играет главную роль в падеже животных. При установлении разных стадий развития патогенных видов кокцидий в большом количестве и исключении других инфекционных заболеваний кокцидиоз считают причиной падежа животных

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокци-дий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно:

счетную камеру Горяева или Мак-Мастера;

гомогенизатор электрический.

2.4.2. П р оведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают. Взвешивают 10 г пробы с погрешностью не более 0,02 г и перекладывают в стакан с 100 см³ воды, ставят в холодильник, выдерживают в течение 12 ч и гомогенизируют 2—3 мин в электрическом гомогенизаторе с частотой вращения 2000 об/мин. Полученную суспензию фильтруют в течение 5 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают, встряхивая пробирку. Наполняют счетную камеру или помещают 0,15 см³ суспензии на предметное стекло, накрывают ее покровным стеклом и выдерживают в течение 2 мин. Число ооцист умножают на коэффициент 67, что представляет собой количество ооцист в 1 г подстилки.

2.4.3. Обработка результатов

2.4.3.1. Определение вида кокцидий проводят согласно соответствующему определителю.

При наличии до 5000 ооцист Е. acervulina в 1 г подстилки не придают им никакого клинического значения. Наличие до 5000 ооцист Е. tenella или Е. nccatux в 1 г подстилки свидетельствует о слабом течении кокцидиоза у содержавшихся на этой подстилке цыплят или же о снижении действия используемого кокцидиоста-тика. Наличие 1000 ооцист Е. maxima в 1 г подстилки свидетельствует о клиническом течении кокцидиоза и недостаточной эффективности аптикокцидиозного препарата.

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2Л. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого дтч самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция ( + ) — 1 —10 ооцист на 1 г кала; средняя инфекция ( + +) —11 — 100 ооцист на 1 г кала; сильная инфекция ( + + +)—больше 100 ооцист на 1 г кала. При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Изменение 1 ГОСТ 25383—82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Утверждено и введено в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 27.05.87 № 1714

Дата введения 01.01.88

Пункты 2.1.1.1, 2.1.2.1 изложить в новой редакции:

<2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284—78; весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104—80 с наибольшим пределом взвешивания 206 г;

центрифугу с частотой вращения 5000 мин-¹;

стаканы стеклянные вместимостью 150—200 см³ и 1000 см³ по Г ОСТ

25336—<82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336—82; стекла предметные по ГОСТ 9284—75 и покровные пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6,

по ГОСТ 6672— 2-го класса точности

/ э; вме

стимостью 50 см³ по ГОСТ 20292—74; посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 25336—82; штатив для пробирок; петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9442—77;

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556—81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026—76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.1 2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм³ горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора дол н^а составлять 1,3 г/см³».

Пункт 24.2,2 исключить.

Пункт 2.1.3.1 изложить в новой редакции: «2.1.34. Из пробы выделяют навеску кала массой 3—5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15—20 см золы. размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в-центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения. 5000 мин^-1. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см³ флотационь jro раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют налете соцнст под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают»

Пункт 2.24 4. Исключить слова: «или Мак. Мастера».

Пункты 2 2.2 1, 2.2.34 изложить в новой редакции: «2 2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45^см³ воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см³ фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-¹. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин — ¹. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное з камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Продолжение см. стр. 338)

2.2 ЗЛ. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражении и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 100*0 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10ЮОО ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 1000*00 — высокой степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения».

Пункт 2.3. Наименование изложить в .новой редакции: «2.3. Метод исследования павших или убитых животных».

Пункт 2.3.1 Л. Заменить ссылку: ГОСТ 1.0*973—75 на ГОСТ 25336—82.

Пункт 2.3.2.1. Первый абзац. Заменить слова: «патологически измененные части кишок» на «исследуемые части кишок».

Пункт 2.3 3.1 изложить в новой редакции: «2.З.З.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4—6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на. одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Ei.meria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. acervulina,Е. maxima, Е. ргаесох. (см. схему. См. с. 339)?>.

Раздел 2 дополнить пунктами — 2.3.4, 2.3.4.1:

«2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа».

Пункт 2 4 1.1. Исключить слова: «и дополнительно: счетную камеру Горяева или Мак Мастера; гомогенизатор электрический».

Пункт 2.4.2.1 изложить в новой редакции: «2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм³ воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см³ в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000* мин—¹. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 50*00 мин-¹. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют’количество ооцист в 1 г подстилки».

Пункты 2.4.3, 2.4.5 исключить.

(Продолжение см. с. 339)

339

(Продолжение изменения к ГОСТ M3-S2) КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

Наименование показателя

Характеристика

Клинические признаки

Патологические изменения

Отдел кишечника

Наличие в мазке развивающихся стадий кок-

Дополнительные признаки

Кровотечения

Глубокие эрозии эпителия

Слепые кишки Тонкая кишка

Кровотечений не отмечено

Большие

шизонты

Большие

шизонты

Слизистый энтерит

12-перстная верхний отдел тонкой кишки

Гаметоциты и мелкие ооцисты

Казеозная мае- Слепые са в слепых без кишках большое количество ооцист

При слабом заражении сероватые или красноватые поражения стенки кишок без видимой крови

личестве

Слабое заражение характеризуется наличием беловатых раздельных фокусов, сильное -слиянием поражений и распространением но кишечнику

Е. tenella

Е, necatrix Е, acervulina (ИУС № 81987 г.:

Слизистонекротический энтерит

Средний отдел Нижний отдел

тонкой кишки тонкой кишки

Гаметоциты и Гаметоциты большие желто- или ооцисты ватые ооцисты

При сильном Беловатый эн-заражении види- судат и казеоз-

мые геморрагии и некрозы

ные массы в тяжелых случаях некроз ниж-

кишечника

Е, maxima Е, ргаесох

Редактор Я. Е. Шестакова Технический редактор А. Г. Каширин Корректор Р. А. Фролова

Сдано в наб. 24.08.82 Подп. к печ. 24.09.82 0,5 п. л. 0,38 уч.-изд. л. Тир. 10000 Цена 3 коп.

Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123557. Москва, Новопресненский пер., 3 Тин. «Московский печатник». Москва, Лялин пер., G. Зак. 931

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза (с Изменением N 1), ГОСТ от 11 августа 1982 года №25383-82

ГОСТ 25383-82
(СТ СЭВ 2547-80)

Группа С79

Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_________________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620
(ИУС N 9, 1992 год). — Примечание изготовителя базы данных.

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.А.Тимофеев, И.А.Коблова, Л.М.Шалова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3154

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.88 Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.87 N 1714

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год


Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней — 20 г, домашней птицы и кроликов — 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п.1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4 °С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания 200 г;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

центрифугу с частотой вращения 5000 мин;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см и 1000 см по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. — Примечание изготовителя базы данных.

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 9412-93. — Примечание изготовителя базы данных.

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2.2. (Исключен, Изм. N 1).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой, степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при патологоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови патологоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему).

КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.3.4, 2.3.4.1. (Введены дополнительно, Изм. N 1)

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.2. Проведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.3, 2.4.3.1. (Исключены, Изм. N 1).

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) — 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) — 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+++) — больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Электронный текст документа
подготовлен ЗАО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1982



Редакция документа с учетом
изменений и дополнений
подготовлена ЗАО «Кодекс»

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза (с Изменением N 1), ГОСТ от 11 августа 1982 года №25383-82

ГОСТ 25383-82
(СТ СЭВ 2547-80)

Группа С79

Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_________________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620
(ИУС N 9, 1992 год). — Примечание изготовителя базы данных.

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.А.Тимофеев, И.А.Коблова, Л.М.Шалова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3154

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.88 Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.87 N 1714

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год


Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней — 20 г, домашней птицы и кроликов — 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п.1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4 °С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания 200 г;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

центрифугу с частотой вращения 5000 мин;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см и 1000 см по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. — Примечание изготовителя базы данных.

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 9412-93. — Примечание изготовителя базы данных.

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2.2. (Исключен, Изм. N 1).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой, степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при патологоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови патологоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему).

КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.3.4, 2.3.4.1. (Введены дополнительно, Изм. N 1)

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.2. Проведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.3, 2.4.3.1. (Исключены, Изм. N 1).

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) — 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) — 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+++) — больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Электронный текст документа
подготовлен ЗАО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1982



Редакция документа с учетом
изменений и дополнений
подготовлена ЗАО «Кодекс»

Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Б. А. Тимофеев, И. А. Кобловз, Л. М. Шалоза ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3154

(Продолжение изменения к ГОСТ 25383—82)

2.2 3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражении и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в I г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения,

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения».

Пункт 2.3. Наименование изложить в новой редакции: «2.3. Метод исследования павших или убитых животных».

Пункт 2.3.1.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10073 —75 на ГОСТ 25330-82.

Пункт 2.3.2.1. Первый абзац. Заменить слова: «патологически измененные части кишок» на «исследуемые части кишок».

Пункт 2.3 3.1 изложить в новой редакции: «2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4—6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на, одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Ei.meria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. acervulina^. maxima, Е. ргаесох. (см. схему. См. с. 339)ъ.

Раздел 2 дополнить пунктами — 2.3.4, 2.3.4.1:

«2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа».

Пункт 2 4 1.1. Исключить слова: «и дополнительно: счетную камеру Горяева или Мак Мастера; гомогенизатор электрический».

Пункт 2.4.2.1 изложить в новой редакции: «2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм³ воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см³ в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-¹. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-¹. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют’количество ооцист в 1 г подстилки».

Пункты 2.4.3, 2.4.5 исключить.

(Продолжение см. с. 339)

338

Наименование показателя

Клинические признаки

Патологические изменения

Отдел кишечника

(Продолжение изменения к ГОСТ 25383—82) КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

Кровотечения Глубокие эрозии эпителия

Слепые кишки Тонкая кишка

Наличие в мазке раз- Большие вивающихся стадий кок- шизонты цидий

Большие

шизонты

Характеристика

Кровотечений не отмечено

Слизистый энтерит

Слизистонекротический энтерит

Дополнительные признаки

Казеозная мае-    Слепые кишки

са в слепых    без изменений

кишках большое

количество

ооцист

При слабом заражении сероватые или красноватые поражения стенки кишок без видимой крови

12-перстная верхний отдел тонкой кишки

I

Гаметоциты и мелкие ооцисты в большом количестве

I

Слабое заражение характеризуется наличием беловатых раздельных фокусов, сильное — слиянием поражений и распространением по кишечнику

Средний отдел тонкой кишки

Нижний отдел тонкой кишки

Гаметоциты и большие желтоватые ооцисты

При сильном заражении видимые геморра

Гаметоциты или ооцисты

Беловатый эн-судат и казеозные массы в тяжелых случаях некроз нижнего отдела кишечника

Е. tenella	Е. necatrix Е. acervulina	Е. maxima	Е. ргаесох
	(ИУС № 8 1987 г.)

УДК 636 : 576.8.07 : 006.354    Группа    С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

25383-82

(СТ СЭВ 2547—80J

Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

DuineMi» Miiiruils. .Methods of laboratory diagnostics

of coccidiosis

—■—■ чц i■ ni—щи—■uni—ишимии—nriTiii ■—mi——i—ti~——ШШГ .nnimui4M mi rm— » •»—Д—^^мЯ|*—***

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3154 срок действия установлен

с 01.01.83 до 01.01.88

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на все ви iu сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547—80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1.    Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы по;-стнлкн.

1.2.    Пробы кала берут от живых п павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000—от 2% животных.

1 2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней -20 г, домашней птицы и кроликов— 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

Издаике официальное

В случае проведения исследований кала от каж юго животного смешивание проб нс производят.

Перепечатка воспрещена

Издательство стандартов, 1982

Стр. 2 ГОСТ 25383-82

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т. п.

1.2.3.    От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п. 1.2.2.

1.2.4.    Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывай: щийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2—4°С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3.    Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов—также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4.    Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5.    Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки:

даты взятия материала для исследования. ¹

ГОСТ 25383-82 Стр. 3

центрифугу марки М-24 или других марок с частотой вращения 2000 об/мин;

сита с ячейками размером 0,5—1,0 мм¹;

стаканы стеклянные вместимостью 150—200 см³ по ГОСТ 10394-75;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 10973-75; стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672—75;

пипетки градуированные вместимостью 50 см³ по ГОСТ 20292-74;

посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 8613-75; штатив для пробирок; петли;

вату Iигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-75; натрий хлористый по ГОСТ 4233-77; цинк сернокислый по ГОСТ 4174-77; магний сернокислый по ГОСТ 4523-77; воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1.    Приготовление раствора Бреза

Готовят насыщенный раствор сульфата магния и насыщенный раствор тиосульфата натрия. Растворы смешивают с дистиллированной водой в соотношении 3:3:1.

2.1.2.2.    Приготовление флотационного раствора

К 1 л горячей дистиллированной воды добавляют избыток соответствующего химического реактива (насыщенного раствора хлористого натрия пли сульфата цинка или раствора Бреза), выдерживают в течение 12 ч и фильтруют через вату в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять приблизительно 1,3 г/см³.

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3 1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3 г, заливают в ступке 15—20 см³ воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через сито и воронку в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 1—2 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают палочкой так, чтобы не образовались пузыри. Не рекомендуется встряхивать содержимое пробирки. Пробирки с флотационным раствором снова центрифугируют, как указано выше.

С помощью петли из каждой пробирки берут по три капли раствора и наносят на предметное сгекло. Покровное стекло используют лишь для рассеяния капли в случае недостаточной обзорности поля зрения. При массовых исследованиях одной и той же пробы допускается не обжигать петлю после каждого переноса

Стр, 4 ГОСТ 25383-82

раствора на предметное стекло, достаточно лишь промыть ее несколькими резкими движениями в пробирке с водой. Однако в начале и конце исследования петлю необходимо обжигать.

Определение наличия ооцист проводят под микроскопом, используя соответствующий определитель.

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1.    Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1.    Для проведения исследования применяют аппаратуру,, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева или Мак-Мастера.

2.2.2.    Проведение исследования

2.2.2.1.    Исследуемую пробу кала тщательно гомогенизируют. Взвешивают от 3 до 5 г кала (в зависимости от необходимости точности определения) и размешивают в стакане с 45 см³ воды. Полученную таким образом суспензию фильтруют через сито. 10 см³ фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 2 мин.

Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают. Полученной суспензией заполняют счетную камеру. Допускается при отсутствии счетной камеры использовать предметное стекло, на которое наносят 0,15 см³ суспензии и накрывают покровным стеклом. Заполненную камеру или предметное стекло с 0,15 см³ суспензии выдерживают в течение 2 мин, чтобы ооцисты могли подняться к поверхности, и подсчитывают количество ооцист. Полученное число, умноженное на 100, представляет собой содержание ооцист в 1 г кала.

Для более точного определения допускается использовать несколько камер и ооцисты подсчитывают в нескольких камерах. При использовании камеры Горяева ооцисты подсчитывают во всех 225 квадратах и полученную сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает число ооцист в 1 см³ взвеси.

2.2.3.    Обработка результатов

2.2.3.1.    У домашней птицы обнаружение единичных ооцист (0—100 ооцист на 1 г кала) свидетельствует о наличии кокцидий в окружающей среде и течении субклинического заболевания.

Наличие 101—1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует:

для Eimeria tenella и Eimeria necatux — о заражении средней степени;

для Eimeria maxima — о сильном заражении;

для Е. acervulina — о слабом заражении.

Наличие свыше 1000 ооцист в 1 г кала — признак сильного заражения.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала (для Е. bovis и Е. zuetnii) свидетельствует о слабой инфек-

ГОСТ 25383-82 Стр. 5

ции, до 5000 — об инфекции средней тяжести, свыше 5000 — о сильной инфекции.

Для определения вида Eimeria используют существующие определители.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком слабой инфекции, до 100000 — сильной инфекции, свыше 100000 — очень сильной инфекции.

2.3. Метод исследования павших животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при паталогоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови паталогоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

2 3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1.    Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 10973-75;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1.    Паталогически измененные части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия меро-зоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

2.3 3. Обработка результатов

2.3.3.1.    В случае установления единичных стадий развития кокцидий заболевание кокцидиозом рассматривается как вторичная инфекция, которая не играет главную роль в падеже животных. При установлении разных стадий развития патогенных видов кокцидий в большом количестве и исключении других инфекционных заболеваний кокцидиоз считают причиной падежа животных

Стр. 6 ГОСТ 25383-82

2.4.    Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокци-дий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1.    Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1.    Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно:

счетную камеру Горяева или Мак-Мастера;

гомогенизатор электрический.

2.4.2.    Проведение исследования

2.4.2.1.    Пробу подстилки хорошо перемешивают. Взвешивают 10 г пробы с погрешностью не более 0,02 г и перекладывают в стакан с 100 см³ воды, ставят в холодильник, выдерживают в течение 12 ч и гомогенизируют 2—3 мин в электрическом гомогенизаторе с частотой вращения 2000 об/мин. Полученную суспензию фильтруют в течение 5 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора и тщательно перемешивают, встряхивая пробирку. Наполняют счетную камеру или помещают 0,15 см³ суспензии на предметное стекло, накрывают ее покровным стеклом и выдерживают в течение 2 мин. Число ооцист умножают на коэффициент 67, что представляет собой количество ооцист в 1 г подстилки.

2.4.3.    Обработка результатов

2.4.3.1.    Определение вида кокцидий проводят согласно соответствующему определителю.

При наличии до 5000 ооцист Е. acervulina в 1 г подстилки не придают им никакого клинического значения. Наличие до 5000 ооцист Е. tenella или Е. nccatux в 1 г подстилки свидетельствует о слабом течении кокцидиоза у содержавшихся на этой подстилке цыплят или же о снижении действия используемого кокцидиоста-тика. Наличие 1000 ооцист Е. maxima в 1 г подстилки свидетельствует о клиническом течении кокцидиоза и недостаточной эффективности аптикокцидиозного препарата.

2.5.    Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1.    Проведение исследования

2.5.1.1.    Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1.    Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого дтя самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

ГОСТ 25383-82 Стр. 7

слабая инфекция ( + ) — 1—10 ооцист на 1 г кала; средняя инфекция ( + +) —11—100 ооцист на 1 г кала; сильная инфекция ( + + +)—больше 100 ооцист на 1 г кала. При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Группа С79

Изменение № 1 ГОСТ 25383-82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Утверждено и введено в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 27.05.87 № 1714

Дата введения 01.01.88

Пункты 2.1.1.1, 2.1.2.1 изложить в новой редакции:

42.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284—78; весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 с наибольшие пределом взвешивания 200 г;

центрифугу с частотой вращения 5000 мин-¹;

25336—£2;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вме

стаканы стеклянные вместимостью 150—200 см³ и 1000 см³ по ГОСТ

стимостью 50 см³ по ГОСТ 20292-74; посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82; штатив для пробирок; петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9442-77;

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.1 2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм³ горячей воды добавляют 400 г хлористого нагрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатым фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора дол к^иа составлять 1,3 г/см³».

Пункт 24.2,2 исключить.

Пункт 24.34 изложить в новой редакции: «24.34. Из пробы выделяют па-‘ ьеску кала массой 3—5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15—20 см золы. размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в-центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения. 5000 мин-¹. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см³ флотационн jro раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют налете социст под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают»

Пункт 2.24 4. Исключить слова: «или Мак. Мастера».

Пункты 22.2 1, 2.2.34 изложить в новой редакции:    «22.2.1.    Взвешивают

5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45^см³ воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см³ фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-¹. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-¹. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное з камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Продолжение см. стр. 338)

337

¹

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.    Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1.    Аппаратура, материалы и реактивы 2.1 Л Л. Для проведения исследования применяют: микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ

8284—78,

весы лабораторные по ГОСТ 24104-80;

ГОСТ 25383-82 — Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

ГОСТ 25383-82
(СТ СЭВ 2547-80)

Группа С79

Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_________________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620
(ИУС N 9, 1992 год). — Примечание изготовителя базы данных.

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.А.Тимофеев, И.А.Коблова, Л.М.Шалова

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3154

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.88 Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.87 N 1714

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год

Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; с числом животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней — 20 г, домашней птицы и кроликов — 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п.1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4 °С или консервируют, добавляя 2,5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоанатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания 200 г;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

центрифугу с частотой вращения 5000 мин;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см и 1000 см по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 6672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. — Примечание изготовителя базы данных.

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 9412-93. — Примечание изготовителя базы данных.

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.1.2.2. (Исключен, Изм. N 1).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 — высокой, степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при патологоанатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови патологоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 21241-89. — Примечание изготовителя базы данных.

чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему).

КЛЮЧ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.3.4, 2.3.4.1. (Введены дополнительно, Изм. N 1)

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.2.1.1.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.2. Проведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.4.3, 2.4.3.1. (Исключены, Изм. N 1).

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) — 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) — 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+++) — больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

ГОСТ 25383-82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Текст ГОСТ 25383-82 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Б.ятшчпшщц

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Donic-Xr * ипитшК. .Методы лабораторной диагностики коэидиоза

(КТ СЭВ 2547—80]

j> i ■ ii —i ■ »—n» ii— ■ i ■ ни I—! ■ i! ■ II »- ■ i и штти ~ этгш1—— ~ i птг ~ ——

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3154 срок действия установлен

с 01.01.83 до 01.01.88

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт на все ви сельскохозяйственных животных и птиц и \ сгаплвливаег лабораторных методов диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547—80.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

IЛ. Для проведения отбирают пробы кала исследований животных, пробы патологического материала, а также пробы но стилки.

1.2. Пробы кала берут от живых павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 — от 10%; ^с число животных от 501 до 1000 — от 5% и с числом животных свыше 1000 — от 2% животных.

1 2.2. Кал берут из прямого кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней -20 г, домашних птиц и кроликов— 10 г.

Отобранные пробы смешивают, иолуч а я объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от к аж животного смешивание проб не производят.

Издаике о фициальном

Перепечатка воспрещена (О Издательство стандартов, 1982)

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямого кишки в количествех, указанном в п. 1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывак щийся сосуд.

До исследований пробы хранят или консервируют при температуре 2—4 ° С, добавляя 2,5% -ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патологоапатомически измененных частей кишки, у кроликов — также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей — из почек.Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2,5% -ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10% -ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

методом проведенной санитарной обработки;

дата взятия материала для исследования. ²

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность с исследуемым слоем.

2Л.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют: микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ

8284—78,

весы лабораторные по ГОСТ 24104—80;

центрифугу марки М-24 или других марок с началом вращения 2000 об / мин;

сита с ячейками размером 0,5—1,0 мм ² ;

стаканы стеклянные вместимость 150—200 см ³ по ГОСТ 10394—75;

чашки лабораторные лабораторные по ГОСТ 10973—75; предметные стекла по ГОСТ 9284—75 и покровные по ГОСТ 6672—75;

пипетки градуированные вместимостью 50 см ³ по ГОСТ 20292—74;

посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 8613—75; штатив для пробирок; петли;

вату Иигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556—75; натрий хлористый по ГОСТ 4233—77; цинк сернокислый по ГОСТ 4174—77; магний сернокислый по ГОСТ 4523—77; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.1.2. Подготовка к исследованию 2Л.2.1. Приготовление раствора Бреза

Готовит насыщенный раствор сульфата магния и насыщенный раствор тиосульфата натрия. Растворы смешивают с дистиллированной водой в использовании 3: 3: 1.

2.1.2.2. Приготовление флотационного раствора

К 1 л горячей дистиллированной воды запас необходимого химического реактива (насыщенного хлористого натрия пли сульфата цинка или раствор Бреза), выдерж в течение 12 ч и фильтруют через вату в чистую склянку.Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 г / см ³ .

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3 1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3 г, заливают в ступке 15–20 см ³ воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через сито и воронку в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют с вращением 2000 об / мин в течение 1—2 мин. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см ³ флотационного раствора и перемешивают палочкой так, чтобы не образовались пузыри.Не рекомендуется встряхивать содержимое пробирки. Пробирки с флотационным раствором снова центрифугируют, как указано выше.

С помощью петли пз каждой пробирки берут по три капли и наносят на предметное стекло. Покровное стекло использует лишь для рассеяния капли в случае недостаточной обзорности поля зрения. При массовых исследованиях одной и той же пробы разрешается не обжигать петлю после каждого переноса

раствор на предметное стекло, достаточно лишь промыть его перемещениями в пробирке с водой.материалы и реактивы, основы в п. 2.1.1, и общую счетную камеру Горяева или Мак-Мастера.

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Исследуемую пробу кала тщательно гомогенизируют. Взвешивают от 3 до 5 г кала (в зависимости от точности определения) размешивают в стакане с 45 см ³ воды. Полученную таким образом суспензию фильтруют через сито. 10 см ³ фильтрата помещают в центрифужную пррбирку и центрифугируют с частотой вращения 2000 об / мин в течение 2 мин.

Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см ³ флотационного раствора и перемешивают. Полученной суспензией заполняют счетную камеру. Допускается при отсутствии счетной камеры использовать предметное стекло, на которое наносят 0,15 см ³ суспензии и накрывают покровным стеклом. Заполненную камеру или предметное стекло с 0,15 см ³ суспензии выдерживают в течение 2 мин, чтобы ооцисты могли подняться к поверхности, и подсчитывают количество ооцист.Полученное число, умноженное на 100, представляет собой содержание ооцист в 1 г кала.

Для более точного определения использования несколько камер и ооцисты подсчитывают в нескольких камерах. При использовании камеры Горяева ооцисты подсчитывают во всех 225 квадратах и ​​полученную сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает число ооцист в 1 см ³ взвеси.

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашних птиц обнаружение единичных ооцист (0—100 ооцист на 1 г кала) свидетельствует о наличии кокцидий в окружающей среде и течении субклинического заболевания.

Наличие 101—1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует:

для Eimeria tenella и Eimeria necatux — о заражении средней степени;

для Eimeria maxima — о сильном заражении;

для Е. ацервулина — о слабом заражении.

Наличие свыше 1000 ооцист в 1 г кала — признак сильного заражения.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцистов в 1 г кала (для Е. bovis и Е. zuetnii) свидетельствует о слабой инфекции

ции, до 5000 — об инфекции средней тяжести, свыше 5000 —о сильной инфекции.

Для определения вида Eimeria используют определители.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком слабой инфекции, до 100000 — сильной инфекции, сверх 100000 — очень сильной инфекции.

2.3. Метод исследования павших животных

Метод исследования заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в взятых при пробалого пробалатом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови паталогоанатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, изменяют стадий развития.

2 3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239—77;

пинцеты по ГОСТ 21241—77;

лаборатории лабораторные стеклянные по ГОСТ 10973-75;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Паталогически измененные части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении.Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим разбавителем, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для наличия меро-зоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Эймерия.Очаги разрезают и с помощью пастеровской пинетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

2.3 3. Обработка результатов

2.3.3.1. В случае установления единичных стадий развития кокцидий заболевание кокцидиозом рассматривается как вторичная инфекция, которая не играет главную роль в падеже животных. При установлении разных стадий развития патогенных видов кокцидий в большом количестве и исключении других инфекционных заболеваний кокцидиоз считается падежа животных

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокци-дий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооциста в 1 г подстилки и оценки по данным оценки тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, в п. 2.1.1, и дополнительно:

счетную камеру Горяева или Мак-Мастера;

гомогенизатор электрический.

2.4.2. П р оведение исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают. Взвешивают 10 г пробы с погрешностью не более 0,02 г и перекладывают стакан с 100 см ³ воды, ставят в холодильник, выдерживают в течение 12 ч и гомогенизируют 2—3 мин в электрическом гомогенизаторе с вращением 2000 об / мин. Полученную суспензию фильтруют в течение 5 мин. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см ³ флотационного раствора и тщательно перемешивают, встряхивая пробирку.Наполняют камеру или помещают 0,15 см ³ суспензии на предметное стекло, накрывают ее покровным стеклом и выдерживают в течение 2 мин. Число ооцист умножают на коэффициент 67, что представляет собой количество ооцист в 1 г подстилки.

2.4.3. Обработка результатов

2.4.3.1. Определение вида кокцидий проводят согласно соответствующему определителю.

При наличии до 5000 ооцист Е. acervulina в 1 г подстилки не придают им никакого клинического значения.Наличие до 5000 ооцист Е. tenella или Е. nccatux в 1 г подстилки свидетелей о слабом течении кокцидиоза у содержавшихся на этой подстилке цыплят или же о снижении действия используемого кокцидиоста-тика. Наличие 1000 ооцист Е. maxima в 1 г подстилки доказательства о клиническом течении кокцидиоза и недостаточной эффективности аптикокцидиозного препарата.

2,5. Метод заражения инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого устанавливаетют подсчет их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2Л. Подсчитанное число ооцистов делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого дтч самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени заражения:

слабая инфекция (+) — 1 –10 ооцист на 1 г кала; средняя инфекция (+ +) —11 — 100 ооцист на 1 г кала; сильная инфекция (+ + +) — больше 100 ооцист на 1 г кала. При оценке инфекции следует не только наличие ооцист различных Eimeria, но и других видов паразитов.

Изменение 1 ГОСТ 25383—82 Животные сельскохозяйственные животные. Методы лабораторной диагностики кокцидиоза

Утверждено и введено в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 27.05.87 № 1714

Дата введения 01.01.88

Пункты 2.1.1.1, 2.1.2.1 изложить в новой редакции:

<2.1. 1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284—78; весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104—80 с наибольшим пределом взвешивания 206 г;

центрифугу с оборотов 5000 мин- ¹ ;

стаканы стеклянные вместимостью 150—200 см ³ и 1000 см ³ по Г ОСТ

25336— <82;

чашки лабораторные лабораторные по ГОСТ 25336—82; предметные стекла по ГОСТ 9284—75 и покровные пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6,

по ГОСТ 6672— 2-го класса точности

/ э; вме

стимостью 50 см ³ по ГОСТ 20292—74; посуду лабораторную фарфоровую; воронки стеклянные по ГОСТ 25336—82; штатив для пробирок; петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9442—77;

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556—81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026—76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.а составлять 1,3 г / см ³ ».

Пункт 24.2,2 исключить.

Пункт 2.1.3.1 изложить в новой редакции: «2.1.34. Из пробы выделяют навеску кала массой 3—5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15—20 см золы. размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в-центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с вращением. 5000 мин ^-1 . Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см. ³ флотационь раствор в растворе, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют.см ³ воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см ³ фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с вращением 5000 мин- ¹ . Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см ³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в 5 мин с вращения 5000 мин — ¹ . Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах.Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

(Продолжение см. Стр. 338)

2,2 ЗЛ. У домашних птиц наличие 50000 ооцистов на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 оосцистов на 1 г кала свидетельствует об заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала — о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препаратом.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 100 * 0 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 — о средней степени заражения, более 5000 — о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10ЮОО ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 1000 * 00 — высокой степени заражения, более 100000 — очень высокой степени заражения ».

Пункт 2.3. Наименование изложить в .новой редакции: «2.3. Метод исследования павших или убитых животных ».

Пункт 2.3.1 Л. Заменить ссылку: ГОСТ 1.0 * 973—75 на ГОСТ 25336—82.

Пункт 2.3.2.1. Первый абзац. Заменить слова: «патологически измененные части кишок» на «исследуемые части кишок».

Пункт 2.3 3.1 изложить в новой редакции: «2.З.З.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашних птиц подсчет ооцист проводит один раз в 7 дней, начиная с двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4—6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и кишечника в месте перехода дненадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом.Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на. одно поле зрения и идентификацию кокцидий вида Ei.meria в соответствии с ключом представленном на схеме. Влияние клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации и стадий развития кокцидий определяет виды ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. ацервулина, Е. maxima, Е. ргаесох. (см. схему. См. с. 339)?>.

Раздел 2 дополнить пунктами — 2.3.4, 2.3.4.1:

«2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. ацервулина менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения — признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз причиной падежа ».

Пункт 2 4 1.1. Исключить слова: «и примерно: счетную камеру Горяева или Мак Мастера; гомогенизатор электрический ».

Пункт 2.4.2.1 изложить в новой редакции: «2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм ³ воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат перемешивают и отбирают 100 см ³ в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с диапазоном вращения 5000 * мин— ¹ . Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см ³ флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с вращением 50 * 00 мин- ¹ .Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют’количество ооцист в 1 г подстилки ».

Пункты 2.4.3, 2.4.5 исключить.

(Продолжение см. С. 339)

339

(Продолжение изменения к ГОСТ M3-S2) КЛЮЧ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИДОВ Eimeria ЦЫПЛЯТ

Наименование показателя

Характеристика

Патологические изменения

Патологические признаки

Наличие в мазке здоровья стадий кок-

Дополнительные признаки

Кровотечения

Глубокие эрозии эпителия

Слепые кишки Тонкая кишка

Кровотечений не особый

Большие

шизонты

большие

шизонты

энлизонты

-перстная верхний отдел тонкой кишки

Гаметоциты и мелкие ооцисты

Казеозная мае- Слепые са в слепых без кишках большое количество ооцист

При слабом заражении сероватые или красноватые поражения кишечника без видимой крови

личестве

зуется наличием беловатых раздельных фокусов, сильное -слиянием поражений и распространением кишечника

Е.tenella

Е, некатрикс Е, ацервулина (ИУС № 81987 г .:

Слизистонекротический энтерит

Средний отдел Нижний отдел

тонкой кишки тонкой кишки

Гаметоциты и Гаметоциты большие желто- или ооцисты

-заражении види- судат и казеоз-

мые геморрагии и некрозы

ные массы в тяжелых случаях некроз ниж-

кишечника

Е, максимумы Е, ргаесох

Редактор Я.Е. Шестакова Технический редактор А. Г. Каширин Корректор Р. А. Фролова

Сдано в наб. 24.08.82 Подп. к печ. 24.09.82 0,5 п. л. 0,38 уч.-изд. л. Тир. 10000 Цена 3 коп.

Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123557. Москва, Новопресненский пер., 3 Тин. «Московский печатник». Москва, Лялин пер., Г. Зак. 931

.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

Страница 1 из 103

Страница 2 из 103

Страница 3 из 103

Страница 4 из 103

Страница 5 из 103

Страница 6 из 103

Страница 7 из 103

Страница 8 из 103

Страница 9 из 103

Страница 10 из 103

Страница 11 из 103

Страница 12 из 103

Страница 13 из 103

Страница 14 из 103

Страница 15 из 103

Страница 16 из 103

Страница 17 из 103

Страница 18 из 103

Страница 19 из 103

Страница 20 из 103

Страница 21 из 103

Страница 22 из 103

Страница 23 из 103

Страница 24 из 103

Страница 25 из 103

Страница 26 из 103

Страница 27 из 103

Страница 28 из 103

Страница 29 из 103

Страница 30 из 103

Страница 31 из 103

Страница 32 из 103

Страница 33 из 103

Страница 34 из 103

Страница 35 из 103

Страница 36 из 103

Страница 37 из 103

Страница 38 из 103

Страница 39 из 103

Страница 40 из 103

Страница 41 из 103

Страница 42 из 103

Страница 43 из 103

Страница 44 из 103

Страница 45 из 103

Страница 46 из 103

Страница 47 из 103

Страница 48 из 103

Страница 49 из 103

Страница 50 из 103

Страница 51 из 103

Страница 52 из 103

Страница 53 из 103

Страница 54 из 103

Страница 55 из 103

Страница 56 из 103

Страница 57 из 103

Страница 58 из 103

Страница 59 из 103

Страница 60 из 103

Страница 61 из 103

Страница 62 из 103

Страница 63 из 103

Страница 64 из 103

Страница 65 из 103

Страница 66 из 103

Страница 67 из 103

Страница 68 из 103

Страница 69 из 103

Страница 70 из 103

Страница 71 из 103

Страница 72 из 103

Страница 73 из 103

Страница 74 из 103

Страница 75 из 103

Страница 76 из 103

Страница 77 из 103

Страница 78 из 103

Страница 79 из 103

Страница 80 из 103

Страница 81 из 103

Страница 82 из 103

Страница 83 из 103

Страница 84 из 103

Страница 85 из 103

Страница 86 из 103

Страница 87 из 103

Страница 88 из 103

Страница 89 из 103

Страница 90 из 103

Страница 91 из 103

Страница 92 из 103

Страница 93 из 103

Страница 94 из 103

Страница 95 из 103

Страница 96 из 103

Страница 97 из 103

Страница 98 из 103

Страница 99 из 103

Страница 100 из 103

Страница 101 из 103

Страница 102 из 103

Страница 103 из 103

.